મંકીપોક્સ વાયરસ રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર કીટ

1. નમૂનાસંગ્રહ:નમૂનો અનુસાર જંતુરહિત ટ્યુબમાં એકત્રિત કરવો જોઈએ

પ્રમાણભૂત તકનીકી વિશિષ્ટતાઓ સાથે.

2. રીએજન્ટ તૈયારી (રીએજન્ટ તૈયારી વિસ્તાર)

કીટના ઘટકોને બહાર કાઢો, સ્ટેન્ડબાય ઉપયોગ માટે તેમને ઓરડાના તાપમાને સંતુલિત કરો.

3. સ્પેસીમેન પ્રોસેસિંગ (નમૂનો પ્રોસેસિંગ એરિયા)

3.1 ન્યુક્લિક એસિડ નિષ્કર્ષણ

વાયરલ DNA નિષ્કર્ષણ કીટની અનુરૂપ આવશ્યકતાઓ અને પ્રક્રિયાઓ અનુસાર ન્યુક્લીક એસિડ નિષ્કર્ષણ માટે 200μL પ્રવાહી નમૂનાઓ, હકારાત્મક નિયંત્રણ અને નકારાત્મક નિયંત્રણ લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

3.2 લ્યોફિલાઇઝ્ડ પાવડર ઓગળવું અને ટેમ્પલેટ ઉમેરવું

નમૂનાઓની સંખ્યા અનુસાર મંકીપોક્સ વાયરસ લ્યોફિલાઇઝ્ડ પ્રિમિક્સ તૈયાર કરો.એક નમૂનાને એક પીસીઆર ટ્યુબની જરૂર છે જેમાં લ્યોફિલાઇઝ્ડ પ્રિમિક્સ પાવડર હોય છે.નકારાત્મક નિયંત્રણ અને હકારાત્મક નિયંત્રણને બે નમૂના તરીકે ગણવામાં આવે છે.

(1) Lyophilized પ્રિમિક્સ ધરાવતી દરેક PCR ટ્યુબમાં 15μL ઓગળતું સોલ્યુશન ઉમેરો, પછી દરેક PCR ટ્યુબમાં અનુક્રમે 5μL એક્સટ્રેક્ટેડ સેમ્પલ/નેગેટિવ કંટ્રોલ/પોઝિટિવ કંટ્રોલ ઉમેરો.

(2) પીસીઆર ટ્યુબને ચુસ્તપણે ઢાંકો, લાયોફિલાઈઝ્ડ પાવડર સંપૂર્ણપણે ઓગળી જાય અને મિશ્રિત ન થઈ જાય ત્યાં સુધી પીસીઆર ટ્યુબને હાથથી ફ્લિક કરો, તરત જ ઓછી સ્પીડ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા પીસીઆર ટ્યુબના તળિયે પ્રવાહી એકત્રિત કરો.

(3) જો તપાસ માટે સામાન્ય રીઅલ-ટાઇમ પીસીઆર ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટનો ઉપયોગ કરો, તો પછી એમ્પ્લીફિકેશન એરિયામાં પીસીઆર ટ્યુબને સીધી ટ્રાન્સફર કરો;જો તપાસ માટે BTK-8 નો ઉપયોગ કરો છો, તો નીચેની કામગીરી કરવાની જરૂર છે: PCR ટ્યુબમાંથી BTK-8 ની પ્રતિક્રિયા ચિપ કૂવામાં 10 μL પ્રવાહી સ્થાનાંતરિત કરો.એક પીસીઆર ટ્યુબ ચિપ પરના એક કૂવાને અનુરૂપ છે.પાઇપિંગ ઓપરેશન દરમિયાન, ખાતરી કરો કે પાઇપેટ 90 ડિગ્રી ઊભી છે.એરોસોલ બેરિયર પાઈપેટની ટીપ્સ કુવાની મધ્યમાં મધ્યમ બળ સાથે મુકવી જોઈએ અને જ્યારે તે પ્રથમ ગિયર પર પહોંચે ત્યારે (પરપોટાને ટાળવા) પાઈપેટને દબાણ કરવાનું બંધ કરવું જોઈએ.કુવાઓ ભરાઈ ગયા પછી, બધા કુવાઓને આવરી લેવા માટે પ્રતિક્રિયા ચિપ પટલને બહાર કાઢો અને પછી ચિપને એમ્પ્લીફિકેશન ડિટેક્શન એરિયામાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે.

4. પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન (શોધ વિસ્તાર)

4.1 પીસીઆર ટ્યુબ/પ્રતિક્રિયા ચિપને પ્રતિક્રિયા ટાંકીમાં મૂકો અને દરેક પ્રતિક્રિયાના નામોને અનુરૂપ ક્રમમાં સારી રીતે સેટ કરો.

4.2 શોધ ફ્લોરોસેન્સની સેટિંગ્સ: (1) મંકીપોક્સ વાયરસ (FAM);(2) આંતરિક નિયંત્રણ (CY5).

4.3 નીચેના સાયકલિંગ પ્રોટોકોલને ચલાવો

ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio નો પ્રોટોકોલ:

 BTK-8 નો પ્રોટોકોલ:

5. પરિણામોનું વિશ્લેષણ (કૃપા કરીને ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ યુઝર મેન્યુઅલનો સંદર્ભ લો)

પ્રતિક્રિયા પછી, પરિણામો આપમેળે સાચવવામાં આવશે.વિશ્લેષણ કરવા માટે "વિશ્લેષણ" પર ક્લિક કરો, અને સાધન પરિણામ કૉલમમાં દરેક નમૂનાના Ct મૂલ્યોનું આપમેળે અર્થઘટન કરશે.નકારાત્મક અને હકારાત્મક નિયંત્રણ પરિણામો નીચેના "6. ગુણવત્તા નિયંત્રણ" ને અનુરૂપ હોવા જોઈએ.

6. ગુણવત્તા નિયંત્રણ

6.1 નકારાત્મક નિયંત્રણ: FAM ચેનલમાં Ct અથવા Ct>40 નથી, CY5 ચેનલમાં Ct≤40 સામાન્ય એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ સાથે.

6.2 હકારાત્મક નિયંત્રણ: સામાન્ય એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ સાથે FAM ચેનલમાં Ct≤35, સામાન્ય એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ સાથે CY5 ચેનલમાં Ct≤40.

6.3 જો ઉપરોક્ત તમામ માપદંડોને પૂર્ણ કરવામાં આવે તો પરિણામ માન્ય છે.નહિંતર, પરિણામ અમાન્ય છે.

પરિણામ અર્થઘટન

નીચેના પરિણામો શક્ય છે:

નૉૅધ: જો અમાન્ય પરિણામ આવે, તો નમૂના એકત્રિત કરીને ફરીથી પરીક્ષણ કરવાની જરૂર છે.